Análisis microbiológico

A continuación, hacemos una descripción de los parámetros y técnicas más utilizadas en nuestro laboratorio para el análisis microbiológico del agua.

Técnicas de filtración, siembra en superficie y en masa (técnica de incorporación en placa). Una de las técnicas más laboriosas y que precisa de profesionales experimentados en los laboratorios es la detección y recuento de Legionella en agua mediante la norma UNE 11731.

Parámetros microbiológicos: Legionella ( ISO11731), aerobios (ISO 6222), Coliformes y E.coli, Pseudomona, Staphylococcus, Enterobacterias, Clostridium, huevas nematodos, Salmonella, parásitos y protozoos, coliformes fecales…

Anualmente participamos en ensayos de interlaboratorios, realizamos aseguramientos de la calidad mensuales de medios de cultivo y técnicas de análisis  ,calibramos y verificamos todos los equipos, igualmente se realizan controles de limpieza, tanto en superficies como ambientales y así un largo etc que nos hace contar con la ACREDITACION ENAC 17025 y la ISO 9001.

Técnica consistente en añadir en una placa estéril de 90 mm de diámetro, de 0,1 a 1 ml de la muestra objeto de ensayo, sobre la que se añaden de unos 15 a 20 ml del medio de cultivo específico para la analítica requerida.

Este medio de cultivo ha de licuarse previamente y atemperarse en un baño termostático, para posteriormente incubarse a la temperatura de crecimiento optimo del microorganismo que estemos buscando.

En esta técnica es fundamental elegir la dilución adecuada de tal modo que el número esperado de colonias típicas formadas en la placa de diámetro 90 mm se encuentra entre 10 y 150. El número total de colonias en la placa (típicas y atípicas) debería ser menor de 300.

Podemos elegir la muestra sin diluir y/o con dilución con el fin de que pasado el periodo de análisis podamos contar las colonias.

Técnica consistente en sembrar la cantidad requerida de muestra o de una dilución de la misma, sobre una placa de 90 mm de diámetro, que, a diferencia del caso anterior, ya contiene el medio específico, lo que evita el choque de calor, e implica que todas las colonias permanecen en la superficie del agar.

Solo admite volúmenes de muestra de 0,1 a 0,5 ml según el grado de secado de las placas.

Se selecciona la dilución de método que el número esperado de colonias típicas formadas se encuentre entre 10 y 150 aproximadamente. El número total de colonias sobre la placa (típica y atípica) debería ser inferior a 200.

Técnica consistente en concentrar un gran volumen de agua problema, haciéndolo pasar a través de un filtro de porosidad dependiente del microorganismo que se desee buscar, se suele llevar a cabo para muestras de bajo contenido bacteriológico, donde todos los microorganismos quedaran retenidos en el filtro, por eso a estas técnicas se les suele llamara de forma coloquial técnicas de concentración pues retenemos todos los microorganismos en el filtro.

En este caso es muy importante seleccionar el volumen que vayamos a filtrar pues en función de ese volumen tendremos un mayor o menor crecimiento de colonias en la placa el número debe ser tal, que permita obtener entre 10 y 100 colonias típicas aproximadamente sobre una membrana. El número total de colonias (típicas y atípicas) sobre el filtro debería ser inferior a 200.

Por técnica de filtración se analizan muestras de agua para distintos parámetros microbiológicos, coliformes, E.coli, Salmonella, Pseudomona, etc.

Laboratorios Omega está comprometido con la calidad y por ello cuenta con la ACREDITACION ENAC 17025 y la ISO 9001.

En laboratorios Omega utilizamos el sistema de filtración Microfil. Es un sistema muy seguro, cómodo y rápido para el análisis microbiológico en rutina de muestras de agua.

Esta técnica consiste en concentrar un gran volumen de agua problema, haciéndolo pasar a través de un filtro de porosidad dependiente del microorganismo que se desee buscar, se suele llevar a cabo para muestras de bajo contenido bacteriológico, donde todos los microorganismos quedaran retenidos en el filtro, por eso a estas técnicas se les suele llamara de forma coloquial técnicas de concentración pues retenemos todos los microorganismos en el filtro.

En este caso es muy importante seleccionar el volumen que vayamos a filtrar pues en función de ese volumen tendremos un mayor o menor crecimiento de colonias en la placa el número debe ser tal, que permita obtener entre 10 y 100 colonias típicas aproximadamente sobre una membrana. El número total de colonias (típicas y atípicas) sobre el filtro debería ser inferior a 200.

Uno de las técnicas más laboriosas y que precisa de profesionales experimentados en laboratorios es la detección y recuento de Legionella spp en muestras de agua, ya que se trata de una técnica mixta que incluye la filtración y la técnica de incorporación en placa:

En un primer paso se procede a la concentración de la muestra mediante el método de filtración en membrana de un determinado volumen de muestra con filtros de un material y porosidad determinada , posteriormente se requiere de un lavado del filtro, al cual se le somete a dos tratamientos, uno de ácido y otra de calor para la eliminación de flora interferente y además se siembra una tercera placa a la que denominamos tratamiento directo, en todas ellas se aplica la técnica de reparto en placas  para su siembra en GVPC.

Posteriormente las tres placas son sometidas a un examen de los técnicos del laboratorio para trabajar las posibles colonias sospechosas de Legionella.

La incubación del cultivo de estas muestras abarca como mínimo 10 días y en algunos de los casos puede irse hasta los 16 días.

Para la detección y recuento de aerobios a 22ºC y 37ºC estamos acreditados según norma ISO 6222, esta técnica está basada en la técnica de incorporación en placa: Depositar en una placa estéril 1ml de muestra directa y/o diluida y verter el medio correspondiente atemperado, mezclar completamente medio e inóculo con movimientos circulares a favor y en contra de las agujas del reloj. Las placas se dejan reposar hasta que se solidifica el medio y posteriormente se incuban invirtiendo las placas a la temperatura correspondiente.